Què cal tenir en compte a l'hora de triar el microscopi adequat per al sistema d'imatge de cèl·lules vives

Per realitzar experiments d'imatge amb cèl·lules vives amb èxit, és fonamental utilitzar l'enfocament adequat. Quan escolliu un microscopi adequat per a la vostra imatge de cèl·lules vives, s'han de tenir en compte els aspectes següents: viabilitat de la mostra, velocitat d'adquisició d'imatges (resolució temporal) i resolució requerida en les tres dimensions.

During live cell imaging, certain environmental conditions must be maintained to avoid detrimental physiological changes. In order to capture physiologically relevant cellular dynamics, live cell experiments require specific environmental conditions, including temperature, pH (via CO2), and humidity control. Furthermore, some experiments may even require hypoxic conditions. Modern incubation systems not only tightly control environmental conditions, they can also provide detailed data reports and alert users to temperature, gas, or humidity variations during the course of an imaging experiment. To minimize or avoid the effects of photodamage, getting the right balance between sensitive detection, accurate label separation (if using >1) i la dosi de llum més baixa per a l'excitació és crucial.

Per als experiments amb cèl·lules vives, l'adquisició d'alta velocitat és sovint crítica, en particular per a l'estudi de processos dinàmics ràpids com l'observació de vesícules. L'ús de filtres òptics comporta limitacions de velocitat a causa de la necessitat d'imatges seqüencials quan es canvien els conjunts de filtres per a cada color, utilitzats per estudiar la interacció de múltiples components. La recollida d'imatges de forma seqüencial requereix més temps que la recollida simultània d'imatges i, com a resultat, es poden perdre moviments ràpids de la mostra durant l'adquisició, ja que cada color té un interval de temps més llarg d'una imatge a la següent. A més, quan la comparació directa entre dos o més colors és essencial, els senyals poden haver-se mogut fins i tot entre l'adquisició individual dels fluoròfors, complicant la interpretació de les dades.

Hi ha disponibles múltiples tecnologies per adquirir imatges en 3 dimensions al llarg del temps. L'elecció del sistema depèn del vostre experiment i de si la vostra prioritat a l'hora d'adquirir la resolució 3D desitjada és la velocitat més alta o la menor il·luminació de la mostra durant la imatge. L'elecció del sistema més adequat ha requerit tradicionalment que escolliu entre un sistema d'imatge de cèl·lules vives basat en càmera o confocal, però les solucions modernes poden proporcionar ambdues modalitats de manera integrada.